DNA测序服务
确定DNA双股链上每一个碱基的确切顺序的过程。是腺嘌呤,鸟嘌呤,胞嘧啶,和胸腺嘧啶,分别用它们的首字母A,T,C,G表示,其排列顺序中蕴藏着各种各样的遗传信息和生命指令 测序方法:我们采用ABI377和ABI310测序仪及配套的BigDye Teminator试剂盒进行DNA的序列测定。BigDye Terminators试剂盒测序的基本步骤主要是:①循环测序反应中的同一反应管内,四色荧光标记的四种ddNTPs(即BigDyeTerminators)与未标记的四种正常dNTPs在DNA聚合酶(AmpliTaq DNA polymerase, FS)的参与下,竟争性地掺入到正在延伸的DNA链末端,当BigDye Terminators掺入到正在增长的DNA链末端后,则链延伸反应终止,而当末端是正常的dNTPs时,则链延伸反应继续进行。经过30个左右的循环测序反应后,即可随机而又特异地扩增到未端碱基是BigDye Terminators的不同长度的DN片段②循环测序反应产物经沉淀、洗涤而纯化,并去除多余的未反应的BigDye Terminators。③电泳与结果分析——电泳时,荧光标记的DNA片段在经过ABI377测序仪激光扫描窗口时被 激发而发出四种特定的不同光谱的荧光。同时,测序仪的专用激光扫描镜头实时扫描不同大小的DNA片段在相应时间通过垂直电泳胶读数区时发射的荧光,将不同大小DNA片段发射的荧光实时地传递给计算机测序数据实时收集软件,并将电泳结果转换成胶图文件及原始数据信号。电泳完毕后,DNA序列分析软件通过分析胶图文件及原始数据信号,得到最终的测序结果。